Nos services

La plateforme IMPReSs fournit un panel de méthodes et d’outils optimisés pour la production, la purification et l’analyse de protéines membranaires. Différents systèmes d’expression sont utilisés en routine au sein de la plateforme pour la production de protéines membranaires et cytosolubles, en particulier les systèmes Pichia pastoris et Escherichia coli, mais aussi d'autres organismes tels que lignées cellulaires de mammifères, Pseudomonas aeruginosa et Anabaena sp. PCC 7120.

Dans le but de s’adapter au mieux à vos besoins, IMPReSs propose des services modulables allant des étapes de clonage jusqu’à la purification de la protéine d’intérêt et sa caractérisation.

1. Conseil sur les stratégies de production

Nous mettons notre expertise à votre service pour élaborer ensemble les meilleures stratégies de clonage, de production, de purification et d’analyse de la protéine d’intérêt en fonction de vos besoins et de vos contraintes.

2. Clonage

Le clonage du gène d’intérêt peut être pris en charge à partir d’ADN plasmidique ou d’ADNc confiés par le client, ou à partir d’un gène synthétique fourni par un prestataire. La plateforme dispose de différents vecteurs d’expression standards adaptés aux systèmes d’expression utilisés, qui peuvent être personnalisés en fonction de vos besoins (tags d’affinité, séquences de clivage …). Des approches classiques de clonage sont utilisées pour l’obtention des vecteurs recombinants.

3. Tests d’expression

Nous proposons une étude de faisabilité de production de la protéine d’intérêt dans le ou les systèmes d’expression disponibles les plus adaptés.

Dans le cas du système d’expression Pichia pastoris, l’utilisation de la technique de Yeastern Blot développée sur la plateforme permet un criblage haut-débit du niveau d’expression de clones recombinants (format plaques 96 puits).

4. Production et préparation des échantillons protéiques

L’étape de production de la protéine d’intérêt peut être réalisée en flasques agitées jusqu’à un volume de 10 litres de milieu, selon vos besoins. Un scale-up en fermenteur de 3 litres est également possible sur demande.

Les protéines membranaires peuvent être fournies sous forme de préparations membranaires, obtenues par ultracentrifugation différentielle après lyse cellulaire. Nous proposons également un criblage des conditions d’extraction et de solubilisation des protéines membranaires pour un compromis optimal entre rendement d’extraction et qualité des protéines extraites.

5. Purification

La plateforme dispose de cinq chaînes de purifications automatisées (de type Äkta Pure, Äkta Purifier et Äkta FPLC), ainsi qu’un panel complet de colonnes et résines de chromatographie d’affinité, d’échange d’ions et d’exclusion de taille. Selon vos besoins, une purification par des méthodes plus spécifiques peut également être mise en place.

Dans le cas de protéines membranaires, un criblage des conditions de purification est fréquemment réalisé afin de s'adapter au mieux aux besoins de chaque protéine et de chaque projet (composition des tampons, criblages de détergents, échanges de détergents, processing des protéines, méthodes chromatographiques...).

6. Caractérisation

A chaque étape, différentes analyses biochimiques sont utilisées pour la caractérisation des échantillons protéiques (électrophorèse, immunodétection, chromatographie d’exclusion de taille). Des études de spectrométrie de masse peuvent également être envisagées.

Par ailleurs, lorsqu'ils sont disponibles, de nombreux tests d'activités peuvent être effectués à chaque étape de la production pour une caractérisation avancée des protéines membranaires. La plateforme est notamment complètement équipée et accréditée pour réaliser des tests radioactifs tels que fixation de ligands (radiobinding) ou tests de transport, y compris au format 96-puits.

7. Collection de RCPG recombinants

La plateforme IMPReSs possède une banque de levures Pichia pastoris exprimant près d’une centaine de récepteurs couplés aux protéines G fusionnés à différents tags d’affinité, permettant ainsi leur production et purification sur demande.